血铅、尿铅的检测应用方案

方案依据GBZ/T 316.1——2018血中铅的测定第1部分:石墨炉原子吸收光谱测定法

本法的检出限为7ug/L，定量下限为20ug/L;测定范围为20ug/L~500ug/L。塞曼背景校正的原子吸收光谱仪相对标准偏差范围为1.6%~2.8%(n=6)，氖灯背景校正的原子吸收光谱仪相对标准偏差范围为1.5%~5.3%(n=6)。

酸脱蛋白-石墨炉原子吸收光谱法

原理

血液样品（以下称血样）用硝酸溶液进行脱蛋白，在283.3nm波长下，用石墨炉原子吸收光谱法测定铅含量。

仪器及试剂

具塞聚乙烯离心管，1.5mL。3旋涡混合器。

离心机，转速大于10000r/min。

微量移液器，量程分别为20AL~200uL、100uL~1000L。

AA-1800H六灯座火焰石墨炉一体原子吸收光谱仪

硝酸:P 2o=1.42g/mL，优级纯。 硝酸溶液:1%(体积分数)。

硝酸溶液:5%(体积分数)。

牛血:肝素抗凝，-20℃保存，用时放至室温摇匀。也可采用低本底人血、羊血等。本底铅含量应低于50ug/L。

标准溶液，采用铅单元素有证标准物质。

分析步骤

仪器操作参考条件

干燥80℃~150℃55s 灰化300℃~350℃ 20s 原子化1600℃5s 停气清除2400℃3s

血铅标准工作曲线系列的配制

将铅单元素标准溶液用1%硝酸溶液稀释成50.0ug/mL铅标准应用液，再用1%硝酸溶液配成浓度为0ug/mL、1.25ug/mL、2.50ug/mL、5.00ug/mL、10.00ug/mL、12.501g/mL铅标准溶液系列。另取6只10ml.容量瓶，编号为1~6号。分别加入0.40mL浓度为Oug/mL~12.50ug/mL的铅标准溶液系列，再用牛血定容至刻度，即配制成浓度为O4g/L、50ug/L、100ug/L、200ug/L、400ug/L、500ug/L的血铅工作曲线标准溶液系列。

样品预处理

血铅标准工作曲线溶液系列预处理方法:分别取0.15mL血铅标准溶液工作曲线系列于具塞聚乙烯离心管内，各管加入0.60mL5%硝酸溶液，立即盖好盖子，强力振摇，然后在旋涡混合器上振摇5min，以10000 r/min离心5min，上清液供测定。

样品预处理方法:将冷冻血样取出，恢复到实验室温度。充分振摇混匀，取出0.15mL，置于1.5mL具塞聚乙烯离心管内，其余处理步骤同上。

样品空白预处理方法:用采血针抽取⒉.OmL水置于采血管中，振荡，其余处理步骤同上

血铅标准工作曲线溶液系列、样品及样品空白的测定

血铅标准工作曲线溶液系列的测定:参照仪器操作参考条件，将原子吸收光谱仪调整到最佳测定状态，取15uL上清液进样，测定各标准系列，每个浓度重复测定3次。2~6号的吸光度值减去1号的吸光度值后，对相应的铅浓度（ug/L）绘制工作曲线或计算回归方程。

样品及样品空白的测定:用测定标准系列的操作条件测定样品及样品空白溶液，空白测定结果应小于检出限。当检测结果大于检出限时，表明样品在采集、运输和存储过程中受到污染，批量样品应作废。测得的吸光度值由工作曲线或回归方程计算铅的浓度（ug/L)。

计算

按式(1）计算血样中铅的浓度:

C=C₀...........( 1)

式中:

C——血中铅的浓度，单位为微克每升（u gL) ;

C₀——由工作曲线或回归方程得的血样中铅的浓度，单位为微克每升（ug/L)。3.7说明

尿中铅的测定--石墨炉原子吸收法

方案依据GBZ/T 303——2018尿中铅的测定，石墨炉原子吸收法

本法的最低检出浓度为1.0 ug/L;定量下限为3.0 ug/L。测定范围为3.0 ug/L~200 ug/L;批内相对标准偏差为1.0 %～2.6%(n=6)，批间相对标准偏差为1.6%～3.9 % (n=6);加标回收率为97 %～104.1 % 。

原理

尿液样品(以下称尿样）加氯化钯基体改进剂后，在283.3 nm波长下,用石墨炉原子吸收光谱法测定铅的浓度。

仪器及试剂

AA-1800H六灯座火焰石墨炉一体原子吸收光谱仪

微量加样器，200 uL，1000 HL。

硝酸，ρ₂₀一1.42 g/mL，优级纯。

硝酸溶液，1 %(体积分数)。

基体改进剂: 0.33 g氯化钯(优级纯)加热微溶于10mL硝酸中，摇匀，用水稀释至500.0 mL。贮存于棕色试剂瓶中，于冰箱内可避光保存一年。

铅标准溶液:采用具有国家标准物质证书号的铅单元素溶液标准物质。

铅标准应用液:用1%硝酸将铅标准溶液稀释成1.0 ug/mL的铅标准应用溶液。

样品及空白的处理方法

铅工作曲线标准系列预处理方法

分别取各管标准溶液0.2mL于具塞聚乙烯离心管中加入0.2mL正常人尿，混匀后供测定。

样品预处理方法

将酸化的尿样从冰箱中取出，恢复到室温后，充分摇匀。吸取0.2 mL于具塞聚乙烯离心管中加入0.2 mL氯化钯基体改进剂,混匀后供测定。当样品浓度超过线性范围时需将样品进行适当稀释后进样.稀释样品时应注意样品、空白及标准系列处理方法应保持一致。测定结果无需计算稀释倍数。

空白预处理方法

取0.2 mL 1 %硝酸于具塞聚乙烯离心管中加入0.2 mL氯化钯基体改进剂,混匀后供测定。

铅工作曲线标准系列的配制

取7只10 mL容量瓶分别加入0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.20 mL、1.60 mL、2.00 ml铅标准应用液，各加氯化钯基体改进剂至10 mL ,配置成0.0 ug/L、20.0 ug/L、40.0 ug/L、80.0 ug/L、120.0 ug/L、160.0 ug/L、200.0 ug/L铅标准系列，

测定

铅工作曲线标准系列测定

参照仪器操作条件，将原子吸收分光光度计调整到最佳测定状态。进样10 uL，测定各标准管的吸光度;从1~6号管的吸光度值中减去О号管的吸光度值后。以吸光度对铅浓度(ug/L)绘制工作曲线计算回归方程。

样品及空白的测定

用测定标准系列的操作条件测定样品溶液和空白溶液,由样品的吸光度值减去空白的吸光度值，由工作曲线或回归方程得尿样中铅浓度(ug/L)。

质量控制

依据GBZ/T 173，用冻干人尿铅国家标准物质作为质量控制样品。质控样品的处理、测定与标准系列及样品的处理、测定一致。在测定样品前后以及每测定10个样品之间，测定一次质控样，以控制样品检测的准确性。

计算

按式（2）计算尿样的铅浓度:

C =C₀×k ..............(2)

式中:

C——尿中铅的浓度，单位为微克每升（ug/L） ;

C₀——工作曲线或回归方程得的尿样扣除空白后铅的浓度，单位为微克每升（ug/L) ;k ——尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度校正系数。

注意事项

所用的基体改进剂中的氯化钯与铅形成稳定的络合物，铅不易在灰化过程中损失，因此灰化温度可以提高到700 ℃~900 ℃，在此温度下，尿样中的大部分干扰成份被清除。

所用容器及实验用品均需经1:1的硝酸溶液浸泡过夜，用水及蒸馏水冲洗干净备用。

尿样采集时间不限，采尿样时要脱离现场环境，换下工作服，搞好个人卫生后，在洁净的房间内留尿，以防环境中铅的污染。

尿样中铅浓度超过测定范围时，可将工作曲线范围提高到400.0 ug/L，按照3倍稀释(0.2 mL尿样,加入0.2 mL 基体改进剂加0.2 mLl%硝酸混匀)、4倍稀释（0.2 mL 尿样,加入0.2 mL,基体改进剂加0.4 mL1 %硝酸混匀）或5倍稀释（0.2 mL尿样,加入0.2 mL 基体改进剂加0.6 mLl %硝酸混匀进行测定。同时样品、空白及标准系列处理方法应保持一致。测定结果无需计算稀释倍数。

整个检测过程的质量保证应按照GBZ/T 295的要求进行。